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非洲豬瘟檢測儀怎么用?新手易踩的坑有哪些?

更新時間:2025-12-12      點擊次數:48

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  對于初次接觸非洲豬瘟檢測儀的新手而言,掌握基本操作流程只是基礎,更重要的是避開操作中的常見誤區,這些“坑"往往是導致檢測結果不準確的主要原因。結合基層檢測實踐,新手使用儀器時需重點關注樣本處理、試劑操作、儀器設置三個環節的常見問題。

  樣本處理環節最易出現“樣本選取不當"和“核酸提取不規范"的問題。新手常錯誤地選擇病變不明顯的樣本,如僅采集生豬的糞便樣本檢測非洲豬瘟,而糞便中病毒含量低且易受雜質干擾,正確的做法是優先選擇血液、脾臟等病毒含量高的樣本。核酸提取時,新手常因離心時間不足(低于3分鐘)或試劑添加順序錯誤,導致核酸提取不,建議嚴格按照試劑盒說明書步驟操作,提取完成后可通過紫外分光光度計檢測核酸純度,確保OD260/OD280值在1.8-2.0之間。

  試劑操作環節的核心誤區是“污染防控不到位"和“體系配制不準確"。PCR檢測對污染極其敏感,新手常忽視“分區操作"原則,在同一區域完成試劑準備、樣本處理和擴增檢測,導致擴增產物污染試劑,出現假陽性結果。正確的做法是劃分獨立的試劑準備區、樣本處理區和擴增區,各區使用專用的移液器和耗材,操作時穿戴一次性手套并及時更換。體系配制時,新手常因移液器操作不熟練導致試劑加樣量偏差,建議使用量程匹配的移液器(如加樣量5μL時使用10μL移液器),加樣前先吸打試劑3次潤洗吸頭,確保移液準確。

  儀器設置和結果判讀環節易出現“程序參數錯誤"和“結果解讀片面"的問題。不同廠家的PCR試劑對應的退火溫度、延伸時間不同,新手常直接使用儀器默認程序,未根據試劑說明書調整參數,導致擴增效率低。例如,某品牌試劑要求退火溫度為60℃,若使用默認的55℃程序,會導致引物非特異性結合,出現假陽性。檢測完成后,新手常僅根據CT值判斷結果,忽視擴增曲線形態,若曲線出現非典型“S"型(如平臺期不明顯),可能是樣本污染或試劑失效導致,需重新檢測。


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